山梅花（學(xué)名：Philadelphus incanus），為虎耳草科山梅花屬下的一個(gè)植物種。

虎耳草科(Saxifragaceae)山梅花屬(Philadelphus)植物在全世界約有75種，我國(guó)有18種及12個(gè)變種或變型，西南、長(zhǎng)江流域至東北部均有分布。山梅花屬植物屬落葉灌木，多生在陽(yáng)坡山地的灌木叢中，通常在5 - 6月開(kāi)花，花瓣4或5瓣，形狀酷似梅花，故得其名。山梅花屬植物是民間廣為應(yīng)用的一種中草藥。山梅花根皮具有解熱鎮(zhèn)痛作用，用于治療瘧疾、痔瘡、挫傷、腰脅疼痛、胃痛、頭痛等病癥；其莖、葉入藥用于治療膀胱炎、黃疸型肝炎；花的浸劑可作為利尿劑，并可增強(qiáng)神經(jīng)系統(tǒng)功能。

山梅花的化學(xué)成分研究進(jìn)展

山梅花屬植物中已發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分主要有萜類、脂肪酸衍生物、苯型化合物等揮發(fā)性成分以及糖類、黃酮、香豆素、香蘭素、烴類、肽類等。

山梅花屬植物中的部分化學(xué)成分

1、揮發(fā)性成分

山梅花屬植物具有獨(dú)特的清香氣味。Andersson S等對(duì)西洋山梅花(Philadelphus coronarius)花的芳香性化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)P. coronarius花含有脂肪酸衍生物、單萜、苯型化合物及含氮化合物等28種揮發(fā)性化學(xué)成分。脂肪酸衍生物的含量為32.4%，12種脂肪酸衍生物中2-壬酮的含量最高(16.0%)；6種單萜類化合物，含量約為47.9%，其中6-乙烯基-四氫-2,2,6-三甲基一2H-吡喃-3 (4H) -酮的含量最高(22.2%)，單萜中含有痕量(少于0.05%)沉香醇(linalool)及其呋喃型、吡喃型衍生物；苯型化合物有6種，含量約為4.5%；含4種氮化合物，含量為15.1%。從上述數(shù)據(jù)可以看出，P. coronarius花中單萜類化合物的含量最高，其次為脂肪酸衍生物。此研究還發(fā)現(xiàn)P. coronarius花的芳香性氣味是由脂肪酸衍生物引起的。另?yè)?jù)報(bào)道，P. coronarius花的甜香味是由2-氨基苯甲醛引起的。

2、糖

在自然界，糖及其衍生物分布很廣。Southwick EE等研究雜交品種大花山梅花(P. grandiflorus)花蜜的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)含有果糖、葡萄糖、蔗糖，其中葡萄糖的含量最高，其次是蔗糖，三種糖的比例為1:1.2:1.1。另?yè)?jù)報(bào)道，山梅花屬植物的葉中含有以聚合態(tài)存在的己胺糖，含量約為1.9 μg/mg蛋白，己胺糖可能是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的基本成分。Bohm BA等在路易斯山梅花(P. lewisii)的花和葉中也發(fā)現(xiàn)了糖類化合物。

3、黃酮

由于黃酮類化合物具有顯著的藥理活性(如抗腫瘤、抗病毒、降血脂、抗自由基等)，因此受到人們的重視。黃酮類化合物在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。Bohm BA等對(duì)P. lewisii花和葉的混合物粉末進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其主要含有黃酮醇及黃烷酮苷類化合物。黃酮醇以單苷、二苷及三苷形式存在，其中三苷類化合物含量較少。黃烷酮類化合物除了柚皮素單苷(naringenin monoglycoside)外，還有圣草酚7-O-葡糖苷(eriodictyol 7-O-glucoside)。P. coronarius除含有上述黃酮類化合物外，還含有其他黃酮苷類化合物。Grancai D等采用比色法進(jìn)行檢測(cè)，P.coronarius枝和葉中黃酮類化合物的含量分別為0.63%和0.01%。山梅花屬植物中的黃酮類化合物見(jiàn)下表。

山梅花屬植物中存在的黃酮類化合物

4、香蘭素

香蘭素(vanillin)，又名香草醛，在自然界中廣泛存在，被譽(yù)為“食品香料之王”，被廣泛用于食品、日用化工、煙草工業(yè)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等行業(yè)，是一類比較重要的化合物。香蘭素按結(jié)構(gòu)可分為甲氧基香蘭素和乙氧基香蘭素。東北山梅花(P.schrenkii)i根中含有甲氧基香蘭素即3-甲氧基-4-羥基苯甲醛。

5、香豆素

香豆素(學(xué)名鄰羥基肉桂酸內(nèi)酯)是一種具有特殊香味的晶體，為重要的香料及化工產(chǎn)品。香豆素類化合物具有香豆素的基本結(jié)構(gòu)，有抗菌、驅(qū)蟲(chóng)、止痛、降壓、平喘、抗氧化、抗艾滋病、抗腫瘤等多種生物活性。除此之外，香豆素類化合物還是很好的熒光材料、激光染料和非線型光學(xué)材料，在分子器件方面具有獨(dú)特的性能。

Mucaji P等從P. coronarius葉的氯仿提取物中分離得到傘形酮7-羥基香豆素(umbelliferone)和莨菪亭(scopolin)。P. schrenkii根中含有7-羥基-8-甲氧基香豆素(hydrangetin)。

6、萜類

萜類為異戊二烯首尾相連的聚合體，有些萜類化合物具有生理活性，如具有抗菌作用的穿心蓮內(nèi)酯，驅(qū)蟲(chóng)作用的山道年等。Mucaji P等從P. coronarius葉的石油醚提取物中分離得到3-β-28-羥基齊墩果烷-11(12),13 (18)-二烯，從氯仿提取物中得到豆甾-3-β-D-葡糖苷。

7、肽類

P. coronarius葉中含有Y-谷氨酰肽類化合物，如γ-L-谷氨?；?L-2-氨基-3-亞甲基戊烯酸和γ-L-谷氨?；?2-氨基-3-亞甲基-4-戊烯酸。

8、微量元素

山梅花屬植物干燥的葉和花中含有氮、磷、鉀、鈣等微量元素。這些元素的含量與植物的生長(zhǎng)年限、土壤、營(yíng)養(yǎng)情況等因素有關(guān)。

9、其他

P. coronarius枝及葉中除含有上述化學(xué)成分外，還含有酚類化合物。Grancai D等對(duì)P. coronarius枝及葉進(jìn)行檢測(cè)，其酚類化合物的含量分別為3.25%和0.70%。此外，P. coronarius葉中還含有山楂醇、鏈烷烴類化合物二十九烷(C29H60)、2-氨基-3-亞甲基-4-戊烯酸。

山梅花的生物活性研究

1 抗自由基

Klecakova J等對(duì)P. coronarius花瓣的生物活性進(jìn)行體外研究顯示，P. coronarius的花瓣具有抗自由基活性。

2抗菌活性

Jantova S等對(duì)小葉山梅花(P.microphyllus)和P.coronarius的抗菌活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明這兩種植物的枝、葉提取物均具有明顯的抗菌活性，抑菌率約為41.8%。

山梅花屬植物的應(yīng)用

《浙江天目山藥植志》記載山梅花根皮八錢，同狗肉燉熟，調(diào)白糖服，治瘧疾、挫傷、腰脅疼痛、胃痛;山梅花根皮加白糖搗爛，貼敷患處，治頭痛。據(jù)《云南中藥資源名錄》記載，山梅花別名毛葉木通，其莖葉甘、平、淡，具有清熱利濕、消炎等作用，主治膀胱炎、黃疸型肝炎。

山梅花屬植物除具有藥用價(jià)值外，還是很好的觀賞植物。山梅花屬植物喜光、耐旱、耐寒，且耐瘠薄，具有生長(zhǎng)快、易于種植的特點(diǎn)。該屬植物樹(shù)形美觀，花期長(zhǎng)，花白色秀麗，芳香沁人，可孤植、叢植于庭園或公園中，又可植于路口、建筑物附近，是理想的庭園綠化和蜜源植物，適于在全國(guó)推廣栽培。

山梅花屬植物在我國(guó)分布廣泛，種類繁多，其根、莖、葉及花均可入藥，可治療多種疾病，而且原料來(lái)源廣泛，廉價(jià)易得；作為觀賞植物花香四溢，令人心曠神怡，是值得大力推廣的多用途藥用植物。從國(guó)內(nèi)外對(duì)該屬植物的研究報(bào)道來(lái)看，該屬植物化學(xué)成分很有特色，但研究并不充分，特別是有關(guān)藥理作用研究的報(bào)道甚少，缺少進(jìn)一步應(yīng)用該屬植物的理論依據(jù)。因此，建議加大對(duì)該屬植物化學(xué)成分研究及活性成分篩選的力度，以發(fā)現(xiàn)該屬植物的新用途，使中藥更好地造福人類。

山梅花的藥理活性

1、歐洲山梅花葉、枝水提物的細(xì)胞毒性研究

歐洲山梅花(Philadelphus coronarius L.)是一種高大、長(zhǎng)莖、落葉的老式灌木，以在晚春開(kāi)出芳香的白花而聞名。Philadelphus L.屬的一些成員以其抗菌，抗自由基和免疫調(diào)節(jié)作用而聞名。因此，這些草本植物是分離活性物質(zhì)的理想來(lái)源。Valko等研究了繡球科歐洲山梅花(Philadelphus coronarius L.)葉、枝水提物的細(xì)胞毒性作用。A431細(xì)胞(人皮膚癌細(xì)胞系)和人乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7)分別用不同劑量的單個(gè)提取物(0,1-100微克干物質(zhì)/ml)處理24 h和72 h，無(wú)論處理時(shí)間如何，兩種植物部位提取物對(duì)MCF-7細(xì)胞的毒性均最高。A431細(xì)胞對(duì)葉片和枝葉提取物的毒性反應(yīng)不敏感，但存在時(shí)間依賴性，慢性治療后毒性有加重的趨勢(shì)。枝葉提取物的毒性作用程度無(wú)顯著差異。研究結(jié)果為今后從這些提取物中分離活性物質(zhì)的研究提供了基礎(chǔ)。

與A431細(xì)胞相比，MCF-7細(xì)胞更容易受到較低劑量的山梅花樹(shù)枝和樹(shù)葉提取物的毒性作用。山梅花葉片提取物對(duì)MCF-7的急性和慢性處理效果相同，而山梅花樹(shù)枝提取物對(duì)MCF-7的減弱細(xì)胞反應(yīng)72 h。兩種提取物處理對(duì)A431細(xì)胞的毒性作用程度相似，對(duì)山梅花葉提取物的慢性暴露敏感性增加。

結(jié)果表明，山梅花枝葉水提物具有劑量依賴性和時(shí)間依賴性的細(xì)胞毒作用。這些效應(yīng)的特征取決于植物的部位、暴露時(shí)間和被測(cè)細(xì)胞系。根據(jù)ED50值，MCF-7細(xì)胞對(duì)MTT法測(cè)定的毒性作用比A431細(xì)胞更敏感。慢性暴露于樹(shù)枝提取物的MCF-7降低了反應(yīng)性，這可能表明存在適應(yīng)機(jī)制。與此相反，A431細(xì)胞對(duì)山梅花葉片和樹(shù)枝提取物的毒性作用越敏感。

我們認(rèn)為山梅花枝葉提取物的不同毒副作用是由于其活性物質(zhì)含量和相對(duì)組成不同所致。之前的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)甚至對(duì)植物不同部位不同物質(zhì)的含量進(jìn)行了描述，支持了這一假設(shè)。這項(xiàng)工作將通過(guò)研究單個(gè)活性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞增殖的影響和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的機(jī)制繼續(xù)進(jìn)行。

2、凍干山梅花葉、花外用劑型:植物的抗菌、抗氧化和抗炎評(píng)價(jià)

山梅花是一種多功能植物，它在民間醫(yī)學(xué)中的使用有著悠久的傳統(tǒng)；然而，從科學(xué)上講，中草藥的醫(yī)學(xué)利用是一個(gè)探索較少的研究領(lǐng)域。我們研究的目的是確定葉和花的生物活性化合物的數(shù)量，并準(zhǔn)備他們的凍干產(chǎn)品，從醫(yī)療軟膏配方，因?yàn)樯矫坊ǖ耐獠繎?yīng)用也沒(méi)有被研究。對(duì)其進(jìn)行體外釋藥、結(jié)構(gòu)分析和生物相容性實(shí)驗(yàn)，以及微生物學(xué)、抗氧化和抗炎性能的研究。結(jié)果表明，制劑的組成和輔料的選擇對(duì)制劑的藥物釋放度、質(zhì)地和生物利用度有較大的影響。在微生物學(xué)試驗(yàn)中，山梅花葉片對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用，但在HaCaT細(xì)胞上對(duì)IL-4的產(chǎn)生沒(méi)有明顯的抑制作用。山梅花是一種很有前途的草本植物，其局部外用于抗菌治療可作為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療的有益補(bǔ)充。

由于文獻(xiàn)中對(duì)山梅花(Philadelphus coronarius L.)的研究較少，本文對(duì)該植物進(jìn)行了特征分析和研究。然而，許多有益的藥物作用，如抗炎和抗菌活性是從在傳統(tǒng)應(yīng)用中注意到的。利用該植物的葉和花為原料，研制了該植物提取物的凍干產(chǎn)品。此外，通過(guò)不同的方法評(píng)估抗氧化能力，并與草藥組成外用劑型。

本課題的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

在天然制劑中，具有良好特征的活性物質(zhì)含量、穩(wěn)定性和易加工性是關(guān)鍵。為此，制備了一種凍干產(chǎn)品。在這種形式下，有效成分是穩(wěn)定的，易于加工。從科學(xué)文獻(xiàn)來(lái)看，凍干產(chǎn)品的制備方法是獨(dú)特的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)研究只研究了山梅花的提取物，其中仍然含有乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑，可能會(huì)影響安全性，導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。

作為研究的一部分，我們測(cè)定了山梅花葉和花的抗氧化活性，以及總多酚和總黃酮含量。多酚是重要的代謝物和強(qiáng)抗氧化劑，能夠防止紫外線輻射和減少炎癥。類黃酮作為抗菌劑和抗氧化劑，它們也有抗炎作用。ABTS和Cuprac檢測(cè)結(jié)果顯示花具有較好的抗氧化能力;DPPH法與FRAP法無(wú)顯著差異。只有ABTS和Cuprac測(cè)定結(jié)果在葉片和花中存在顯著差異，其主要原因可能是花中檢測(cè)到的活性成分多于葉片。沒(méi)食子酸和槲皮素是兩種知名的有效抗氧化化合物;它們能防止氧化應(yīng)激。這兩種化合物只在花中發(fā)現(xiàn)，這解釋了花為什么具有更好的抗氧化能力。不同的抗氧化活性測(cè)定方法是基于不同的機(jī)制，敏感性也不同，這就解釋了不同方法對(duì)葉片和花的抗氧化能力測(cè)定結(jié)果差異不顯著的原因。這就是為什么建議用不同的方法來(lái)測(cè)試抗氧化能力。

山梅花的花、葉體外殺傷試驗(yàn)。與對(duì)照相比，花對(duì)細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)沒(méi)有抑制或延緩作用，而葉對(duì)白色念珠菌和金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)有延緩作用。

根據(jù)科學(xué)文獻(xiàn)，山梅花具有抗菌特性。以前也曾用微量稀釋法對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌進(jìn)行過(guò)研究。與本研究的其他草本提取物相比，證實(shí)該提取物具有較強(qiáng)的抗菌作用。在我們的系列實(shí)驗(yàn)中，研究了凍干花和葉的抗菌性能，并進(jìn)行了抗真菌的研究。首先進(jìn)行微量稀釋。結(jié)果表明，山梅花的花瓣降低了大腸桿菌的活性，而山梅花葉降低了金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的細(xì)胞活性。為了獲得本課題的進(jìn)一步信息，我們繼續(xù)進(jìn)行了體外殺菌的時(shí)效試驗(yàn)，研究了山梅花隨時(shí)間推移對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的生長(zhǎng)受到山梅花葉片的影響，而花沒(méi)有引起任何變化。然而，這些結(jié)果與微量稀釋的結(jié)果不一致，因?yàn)楹苊黠@，葉片具有抗菌潛力。時(shí)間間隔測(cè)試被認(rèn)為是兩種方法中更準(zhǔn)確的，因?yàn)樗鼘r(shí)間作為實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要因素。

將山梅花葉和花的提取物分別置于先前發(fā)炎的HaCaT細(xì)胞上檢測(cè)。結(jié)果表明，盡管繡球花科植物山梅花的抗炎作用在過(guò)去已經(jīng)被評(píng)估過(guò)，但花提取物預(yù)處理并沒(méi)有顯著降低IL-4水平。Dilshara等人研究了大葉金絲桃葉提取物是否具有抗炎作用。我們觀察到，提取物可以抑制一些促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，如NO、PGE2和TNFα。此外，Nakamura等研究發(fā)現(xiàn)，大葉金針花可降低IL-6的mRNS表達(dá)。

IL-4 ELISA檢測(cè)結(jié)果。數(shù)據(jù)為6孔的平均值±SD。用山梅花的葉(5%)和花(3%和5%)預(yù)處理HaCaT細(xì)胞沒(méi)有顯著降低IL-4的產(chǎn)生。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;n = 5。組間比較采用普通單因素方差分析。

精心挑選的輔料可能會(huì)影響外用制劑的許多特性，通常它們還可以通過(guò)增加生物利用度來(lái)支持藥物效果。在確定藥膏成分時(shí)，選擇輔料，以獲得最佳的有效成分的潛在生物利用度。根據(jù)Csizmazia等人的研究，蔗糖酯(如SP70)能夠增強(qiáng)活性物質(zhì)(如布洛芬)的穿透性和效果。這同樣適用于Tefose 63;在Abd-Elsalam等人的研究中，Tefose 63提高了伏立康唑的生物利用度和效果。我們的體外釋放研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。CMP 2效果最好，CMP 1、4、5次之。釋放率最低的是CMP 3和6。這些結(jié)果表明，以Tefose 63或SP70作為表面活性劑的處方最終具有更好的釋放特性，這可能導(dǎo)致活性藥物成分更好的生物利用度。

不同o/w軟膏成分的釋放概況。CMP 4的持續(xù)擴(kuò)散曲線最好，其次是CMP 2和CMP 5, CMP 3和CMP 6的持續(xù)擴(kuò)散曲線更好。結(jié)果為6個(gè)樣本的平均值±SD。

然而，表面活性劑和滲透增強(qiáng)劑的應(yīng)用可能極大地影響不同外用制劑的生物相容性。細(xì)胞相容性是最低要求。必須強(qiáng)制檢查每種情況下制劑的安全性。在我們的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行了iso標(biāo)準(zhǔn)的MTT測(cè)試。結(jié)果表明，山梅花葉、山梅花花及膏體成分安全無(wú)毒。在每一種情況下，細(xì)胞活力值都超過(guò)70%，符合ISO 10993-5的建議。

在藥品和化妝品的情況下，患者的依從性是一個(gè)重要的因素。準(zhǔn)備工作必須盡可能耐心友好，盡量減少或避免不方便。對(duì)于軟膏，質(zhì)地可能是研究依從性的一部分，因此進(jìn)行了質(zhì)地分析。為此，我們選擇了o/w型乳狀軟膏作為劑型，因?yàn)樗某矶容^輕，很受患者的歡迎。質(zhì)地分析顯示CMP 2和CMP 5的粘稠度最高(均含有tedefos 63)， CMP 3和CMP 6的粘稠度最低(均含有Sedefos 75)，但所有成分都易于涂抹和涂抹。

質(zhì)地分析結(jié)果。不同表面活性劑對(duì)不同軟膏的耐藥性能的影響。CMP 2和5的一致性最差，CMP 3和6的一致性最差。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;n = 5。采用普通單因素方差分析對(duì)制劑進(jìn)行比較。圖中以星號(hào)表示顯著差異。*表示p < 0.05有顯著差異。

目前的研究為研究人員提供了山梅花新的和有用的信息，該植物是一種化學(xué)和治療性質(zhì)廣泛但科學(xué)研究較少的植物。在實(shí)驗(yàn)中，利用花和葉研究了一些草藥的假定作用?；瘜W(xué)化合物的鑒定和有效藥物成分的確切數(shù)量的確定增加了目前關(guān)于植物的知識(shí)。將凍干后的產(chǎn)品加入到制劑中配制膏劑。這提高了應(yīng)用草藥局部考慮的抗菌潛力山梅花的可能性。

制備的軟膏組合物(a)的體外細(xì)胞毒性;不同濃度山梅花葉和花的體外細(xì)胞毒性(b)。以PBS的百分比計(jì)算細(xì)胞活力。所有樣品都是安全的;細(xì)胞存活率均在80%以上。數(shù)據(jù)為6孔的平均值±SD。采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。顯著差異用星號(hào)表示。****表示p小于0.0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉冬梅, 盛繼文, 李鳳容, 楊云秋. 山梅花屬植物化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展. 國(guó)際中醫(yī)中藥雜志, 2006, 28(1): 13-17.

[2] Valko V, Fickova M, Pravdova E, Nagy M, Grancai D, Czigle S. Cytotoxicity of water extracts from leaves and branches of Philadelphus coronarius L. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2006 Jul;150(1):71-3. doi: 10.5507/bp.2006.007. PMID: 16936903.

[3] Pet? á, Kósa D, Haimhoffer á, Nemes D, Fehér P, Ujhelyi Z, Vecsernyés M, Váradi J, Fenyvesi F, Frum A, Gligor FG, Vica? LG, Marian E, Jurca T, Pallag A, Muresan ME, Tóth Z, Bácskay I. Topical Dosage Formulation of Lyophilized Philadelphus coronarius L. Leaf and Flower: Antimicrobial, Antioxidant and Anti-Inflammatory Assessment of the Plant. Molecules. 2022; 27(9):2652. https://doi.org/10.3390/molecules27092652.